雨蛙肽(雨蛙素)CS-01F98230_上海莼试生物技术有限公司

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一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
雨蛙肽(雨蛙素)	Caerulein	0.5mg\|1mg	CS-01F98230

Caerulein 雨蛙肽（雨蛙素）是囊收缩素（CCK）的肽类类似物，已经成功运用于大鼠、小鼠、狗和叙利亚仓鼠等动物急性炎（AP）模型的建立。可采用静脉注射、皮下注射或腹腔注射的途径给药，静脉注射佳。建模机制在Caerulein 雨蛙肽（雨蛙素）能刺激，促使胰蛋白水解酶大量分泌，引起腺泡自溶。可通过严格控制注射剂量，注射频率控制成模时间以及模型的严重程度。

Caerulein 雨蛙肽（雨蛙素）方法建立模型的优势在于相对简单，不需手术创伤小，成本较低，产生AP迅速，给药方式多。适合用于研究急性炎（AP）的细胞生物学和病理生理特性以及研究全身性疾病表现。除了调研AP疾病的肺脏方面变化，还可有效阐明内脏内分泌相互作用如分泌活素和CCK水平。还可用来评估有毒物质终止后受伤组织的愈合和修复情况。但该模型大的缺点在于尽管注射大剂量的Caerulein 雨蛙肽（雨蛙素）都只能产生轻微的炎，几乎无死亡率。

现在也有很多研究者联合使用Caerulein 雨蛙肽（雨蛙素）和LPS建立炎模型，在一定程度上弥补了单一使用Caerulein 雨蛙肽（雨蛙素）建模的缺陷。因为LPS作为一种内毒素，可激活单核细胞释放细胞因子从而启动全身性炎症反应。临床上内毒素水平与疾病的严重程度密切相关。Caerulein 雨蛙肽（雨蛙素）与LPS建立SAP模型的协同作用主要表现为：前者刺激胰液酶破坏胰脏，持续性激活炎症细胞释放炎症因子。随后LPS破坏炎症介质的正常反应，进而发展局部的炎为全身性的严重性炎症反应。

纯度：≥97% (HPLC) (实际达到98%的含量)

分子式：C58H73N13O21S2

分子量：1351.5

CAS：17650-98-5

外观: 白色粉末
序列: pGlu-Gln-Asp-Tyr(SO3H)-Thr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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