牛血清白蛋白(低内毒素)CS-01F98157_上海莼试生物技术有限公司

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一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
牛血清白蛋白(低内毒素)	BSA, Low Endotoxin	25g	CS-01F98157

本品为低内毒素的牛血清白蛋白（BSA, Low Endotoxin），经热休克法处理外，另还经活性炭，去离子和透析处理，保证产品中内毒素含量低于1.0 EU/mg。在内毒素水平敏感的细胞培养中，该产品可作为内源性脂肪酸，微量元素和生长因子的天然载体蛋白；也非常适合用作无血清或化学成分限定的细胞和组织培养中的营养物质的载体蛋白；还是一种有效成分来稳定和稀释敏感蛋白。也可用于ELISA等诊断检测。

牛血清白蛋白，英文名称为Bovine Serum Albumin，也称Bovine albumin，或Cohn Fraction V，简称BSA。BSA有着极其广泛的实验室应用，在免疫实验中常用作封闭剂，包括ELISA、WB(Western Blot)。作为载体蛋白，将其交联于半抗原和其他弱抗原可以使它们在抗体生产中具有更的免疫原性。在限制性内切酶消化反应中，BSA常常被用作一些酶的反应稳定剂，并且能防止它粘附到管壁和枪头上。BSA也常用于生物制药的生产过程或者作为营养物用于细胞和微生物培养。除此之外，还作为蛋白定量检测的标准品使用。我们提供的BSA产品，使用优质牛血浆，利用热休克法（Heat Shock）法制备而成。

CAS：9048-46-8

分子量（M. Wt.）：66 kDa

外观：米色（灰白色）粉末

湿度：：＜5.0%

灰分（Ash）：＜2.0%

pH值（pH Value）：6.5-7.5

白蛋白（Albumin）：≥98%（电泳）

总蛋白（Protein）：≥97%

重金属（Heavy Metals）：≤20 ppm

内毒素：＜1.0 EU/mg

溶解性：易溶于水（7%（w/v）in water）
储存条件：4℃密封，有效期至少5年

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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