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分子生物学试剂 > 蛋白质研究 > TCEP•HCl
产品名称:
TCEP•HCl
型号:
CS-01F98133
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国产
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产品简介
TCEP•HCl现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

TCEP•HCl

TCEP Hydrochloride

1g|5g

CS-01F98133

本品适用于凝胶电泳以及固相金属离子亲和层析(IMAC)的准备步骤,用作还原剂来破坏蛋白内或蛋白间的二硫键。也特别适用于马来酰亚胺偶联半胱残基反应,它能够预防半胱残基形成二硫键,也不会像DTT或β-ME,本身易与马来酰亚胺反应。RNA分离实验也常用于组织匀浆步骤。

(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP hydrochloride, TCEPHCl)是一种不含硫醇基且无臭的化合物,广泛应用于生物化学和分子生物学中,用作多肽或蛋白质的二硫键还原剂。与其他类似的还原剂如二硫苏糖醇(DTT),β-巯基乙醇(β-ME)相比,TCEPHCl 具有多种优点:1)无异味——实验台上使用即可,勿需通风橱;2)稳定性高——化合物本身结构的稳定性使得在操作、使用以及保存的过程中不需要做任何预防措施来避免氧化发生。不会挥发,室温反应即可。室温稳定,抗空气氧化。水溶性缓冲液,酸液以及碱液中稳定。不会与蛋白中的其他功能基反应;3pH工作范围广——几乎溶于任何pH值的水溶性缓冲液,pH有效工作范围为1.5-9.0。直接溶于水后的pH值约为2.54)还原性——对于大部分实验,5-50 mM TCEPHCl即可提供足够的摩尔力,于室温条件作用几分钟来充分还原二硫键;5)兼容性广——不含有硫醇基,进行下游的巯基修饰实验如马来酰亚胺偶联不需要提前去除此还原剂。

中文别名:TCEP盐酸盐;三(2-酰乙基)磷盐酸盐;三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐

英文别名:Tris-(2-carboxyethyl)-phosphine hydrochloride

CAS51805-45-9

分子式:C9H15O6PHCl

分子量:286.7

密度(Density):1.041 g/mL at 25

外观:白色晶体

熔点:177

溶解性:溶于水(50mg/mL

纯度:>99%
储存条件:28℃保存,避光和避潮

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:TCEP• HCl 1g 5g 

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