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考马斯亮蓝G250 | Coomassie Brilliant Blue G250 | 10g | CS-01F98116 |
考马斯亮蓝是两种相似三苯甲烷染料的总称,有G250和R250两种,结构上前者比后者多了2个甲基,命名上“G”为Green 的缩写,因G250的蓝色染料泛浅绿色;命名上“R”为Red的缩写,因R250的蓝色染料呈微红色调;“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是:通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力,考马斯亮蓝与蛋白质形成但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基),从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
考马斯亮蓝R250更多用于电泳蛋白的染色,染色灵敏度比氨基黑高5倍,可达0.1µg蛋白。但是染色背景比较深,需要褪色后才能进行蛋白条带的观察。考马斯亮蓝G250对蛋白胶染色的灵敏度相对较差,低检测到0.5µg蛋白。但是因其在三氯乙酸中不溶而以胶体形式存在,选择性的和蛋白质结合形成复合物,染色迅速,着色深的蛋白质条带数秒内可以显现出来,约45min后着色深。而且染色背景低,不需要脱色即可进行蛋白条带的观察。因此,非常适合对电泳凝胶蛋白的快速定性分析。 考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析,即 Bradford蛋白结合检测法(Bradford protein-binding assay),此方法利用的就是G250与蛋白质结合的特性,Bradford试剂(也就是酸化的G250溶液)为阳离子,主要为双质子化,溶液为红色,其大吸收波长(Amax)为470 nm。当与蛋白稳定结合后,G250以阳离子,非质子化的形式存在,溶液变为蓝色,大吸收波长迁移到595 nm。蓝色阳离子形式染料的量与样本中蛋白的量成正比,因此通过直接测定595nm的吸光度来反映蛋白量。此法的优点在于G250与蛋白质结合所需的时间较短(约2min左右),且结合的G250-蛋白质复合物室温下约1h内保持稳定。反应灵敏度高,是一种非常常用的微量蛋白快速定量方法。 产品性质: 中文别名:酸性蓝90;考马斯亮蓝G;康美赛蓝G250 英文别名:Acid blue 90 Coomassie Brilliant Blue G CAS:6104-58-1 分子式:C47H48N3NaO7S2 分子量:854.02 外观:蓝色至红色结晶粉末 溶解性:微溶于水,好先溶于甲醇或者乙醇。 |
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