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产品名称:
PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)
型号:
CS-01F98024
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产品简介
PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)

PAGE protein staining kit

250ml|1000ml

CS-01F98024

本试剂盒适用于快速检测PAGE胶上的微量蛋白质,它的敏感度几乎可以达到银染的敏感度(ng级水平或者更高),但是比银染简单、稳定、重复性高。染色液所含有的成份和PAGE胶中的SDSTRIS共同作用形成特殊复合物沉淀在胶基质中形成白色的背景染色。有蛋白的地方,蛋白质的存在干扰这种复合物沉淀的形成,因此蛋白条带仍旧保持透明无色,在黑色的背景下,就可以清晰见到透明的蛋白条带。

产品特点:

1.电泳后采用两个简单步骤,15分钟内完成全部过程。

2.环保染料,完全不含有各种醋酸、甲醇等有毒有刺激性成份。

3.蛋白条带为不透明白背景上的透明条带,灵敏度为传统方法的10倍以上(纳克级或者更高)。

4.可逆染色,完全不影响蛋白性质,不影响抗体抗原结合性质。如果需要可以脱色15分钟后继续做蛋白电洗脱(切下特定条带脱色后洗脱下来可以用来做抗原生产使用)、定量、Western blot实验、质谱分析、N末端测序等。

5.在普通双蒸水中可以保留一年以上,不退色,缩小,蛋白质不扩散,一年后依然可以用来做Western blot等蛋白微分析。

操作步骤:

1. 染色

1) 电泳后用清水冲洗胶30-60 秒钟,然后将PAGE 胶放置于一个透明的玻璃培养皿中,根据胶大小倒入适量的染色液(确保胶都浸没在染色液内,20-25ml 足够染色一块普通的8×10cm mini 胶了),摇床上轻摇染色10-15 分钟(10-15%15 分钟,5-7.5%胶可缩短时间到10 分钟)

2) 倒弃染色液,加入20-25ml 的显色液,立刻同时用手轻摇胶显色0.5-1 分钟(将透明培养皿放在一个黑色(暗)背景上观察条带出现情况,此时在不透明的白背景上应该看到透明的蛋白条带,不要显色时间过长,过长反而会降低分辨率)。

3) 看到满意条带后,用清水冲洗1-2 分钟后,放置于蒸馏水中保存。

2. 脱色

1) 根据个人需要将所需目的条带切下后或者直接整块胶加入适量脱色液,摇床上轻摇10 分钟或者直到脱色完全,后用清水冲洗几次。

2) 现在胶可以用于蛋白电洗脱,Western blot 等操作,或者可以再用传统方法染色。

储存条件:室温避光,有效期12个月。
本制品别名:可逆微量蛋白染色试剂盒|敏感可脱色PAGE胶蛋白染色试剂盒

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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