上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
蛋白快速染色液
型号:
CS-01F98000
生产地址
国产
产品价格
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产品简介
蛋白快速染色液现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

蛋白快速染色液

FastStain Protein Staining Reagent

500ml

CS-01F98000

本产品采用独特的配方,可对电泳后凝胶上的蛋白质条带进行染色,而对凝胶本底几乎没有着色。染色过程仅需15分钟,染色后几乎不需要脱色。本产品灵敏度高,可检测到15ng BSA蛋白;若实验对检测灵敏度有较高要求,可将凝胶放置在染色液中2小时,可达到大灵敏度(BSA5ng)

注意事项:

1、操作时请务必佩戴手套,如溅到皮肤上,请立即用大量水冲洗。

2、染色前的凝胶洗涤非常重要,否则会造成凝胶染色背景加深。

3、如染色后有轻微背景,可将染色后的凝胶用过量蒸馏水室温洗涤、脱色。

4、本产品适用于变性和非变性凝胶电泳后的蛋白染色。

操作步骤:

I 常规操作步骤:

1、常规PAGE电泳完成后,小心取下凝胶,根据凝胶的大小,将其放置在一个可微波加热的容器中。

2、加入足量的纯水,使凝胶可以在其中自由晃动,微波加热至沸腾。室温晃动2 min,彻底弃去水。

3、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到纯水洗涤后的凝胶的盒中,使其足以没过凝胶,轻轻晃动。并在微波炉中高火加热至沸腾,取出后室温轻轻摇动,5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色,15 min后显色基本完成。

注意:此操作检测的灵敏度为:用BSA检测,灵敏度为15ng。若实验对检测灵敏度有较高要求,可将凝胶放置在染色液中2小时,可达到大灵敏度(BSA检测,灵敏度为5ng)

II 快速助染步骤:

1、常规PAGE电泳完成后,小心取下凝胶,根据凝胶的大小,将其放置在一个可微波加热的容器中。

2、加入足量的纯水,使凝胶可以在其中自由晃动,微波加热至沸腾。室温晃动2 min,弃去水。

3、重复步骤2两次。

4、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到含纯水洗涤后的凝胶的盒中,使其足以没过凝胶,轻轻晃动后,微波高火加热至沸腾,取出后置于室温并轻轻晃动,5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色,15 min后显色完成。

注意:此操作检测的灵敏度为:用BSA检测,灵敏度为5ng
储存条件:室温

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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