SDS-PAGE快速电泳液CS-01F97999_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
SDS-PAGE快速电泳液	Fast SDS-PAGE Running Buffer(10×)	500ml	CS-01F97999

SDS-PAGE是蛋白质科学研究中为常用的技术之一，使用常规SDS-PAGE电泳缓冲液(TG，Tris-Glycin系统)进行电泳时，电泳所需的时间一般为90分钟左右(mini胶)，应用本产品可使同样的mini胶的SDS-PAGE所需的电泳时间缩短至20-30min，同时电泳后的条带较使用常规的TG电泳缓冲液所跑出的条带分辨率提高且更加清晰。本产品的使用非常简单，只需将您使用的常规TG电泳缓冲液系统更换为本产品的稀释液，调整电压后进行电泳即可，无需添加任何实验步骤。同时稀释为工作液的本产品可重复使用4-5次。本产品既可节省您宝贵的时间也可降低您的实验成本。

注意事项：

1、操作时请务必佩戴手套，如溅到皮肤上，请立即用大量水冲洗。

2、本产品中含有SDS，适合变性凝胶电泳，不适合非变性凝胶电泳。

3、应用本产品所进行的SDS-PAGE的结果显示，本产品的应用会使蛋白的分辨范围发生变化，同等浓度的凝胶，其分辨的低分子量要小于使用TG电泳缓冲液(见下表)。

操作步骤：(以Bio-Rad mini胶及相关配套设备为例)

1、本产品为10倍浓缩液，使用时用纯水10倍稀释后配制成工作液(例如：取100ml本产品后用纯水定容至1 L)。

2、将适量的本产品加入到电泳槽的内、外槽中，调整电源为恒压200-250 V进行电泳。电泳指示剂溴酚蓝至凝胶底部，所需时间约20-30 min。

3、电泳完成后收集电泳槽内、外槽电泳液，4℃保存，可重复使用4-5次，但如发生浑浊请勿使用。
储存条件：室温

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：SDS-PAGE快速电泳液 500ml

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