上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
His标签蛋白纯化树脂
型号:
CS-01F97931
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产品简介
His标签蛋白纯化树脂现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

His标签蛋白纯化树脂

GoldBalb His-tag Purification Resin

2mL|10ml|100ml|1L

CS-01F97931

本产品是一种新型的可以兼容还原剂和螯合剂,并能简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白的纯化介质。1mLGoldBalb His-tag Purification Resin多可纯化1015mg带有His标签重组蛋白。对于分子量为50kD的带有His标签重组蛋白,1mLGoldBalb His-tag Purification Resin实际多可纯化约35mg蛋白。本品储存在30%乙醇中,每mL0.5mL为凝胶,0.5mL为液体。使用时宜把凝胶充分重悬后再吸取。

本产品采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Sepharose CL-6B)为基质,并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术,和目前市售的大多数Ni-NTA agarose或类似产品相比,非特异性蛋白结合显著降低,耐受压力,镍离子螯合非常稳定。和同类产品相比,本产品由于镍离子基本不会流失,重复使用本纯化介质时不需要重新装载镍离子。

本产品已经螯合了镍离子,呈蓝色,凝胶的颗粒直径为45165μm。可耐受的大压力为0.025MPa,约合5.8psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的推荐流速为0.5mL/min

工作原理:

通常带有6个组标签的重组蛋白或带有6个以上连续组标签的重组蛋白,被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过GoldBalb His-tag Purification Resin时,重组蛋白His标签上的组残基能特异性地结合到GoldBalb His-tag Purification Resin中的镍离子上,其它蛋白则不能被结合。洗涤后,His标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱,从而被分离纯化。

产品特点:

本产品对His标签重组蛋白的亲和力、选择性高。

使用本产品可以获得高纯度的His标签重组蛋白,可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。

本产品可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。

大蛋白结合量为2030mg蛋白/mL凝胶。实际使用时的大结合量取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小,分子量越大则大结合容量越大,分子量越小则大结合容量越小。对于分子量为50kD的蛋白,每mL凝胶的实际大纯化量约为610mg,对于分子量为100kD的蛋白,每mL凝胶的实际大纯化量约为1220mg。但对于分子量相同的蛋白,也会因为蛋白本身特性的不同,结合的大容量也会有所不同。

本产品可以很好地耐受DTT等还原剂以及EDTA等螯合剂。

本产品可耐受20mMDTT等还原剂,以及20mMEDTA等螯合剂。这为需要添加还原剂或螯合剂的蛋白样品的纯化提供了可能性。本产品不兼容8M尿素和6M盐酸胍。对于包涵体蛋白的纯化,在采用8M尿素或6M盐酸胍溶解蛋白的情况下,需要通过透析去除尿素和盐酸胍后才能使用本产品进行His标签蛋白的纯化。
保存:4℃,有效期1年。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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