上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
LP8000转染试剂
型号:
CS-01F97814
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国产
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产品简介
LP8000转染试剂现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

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规格

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LP8000转染试剂

LP8000 Transfection Reagent

0.5mL|1.5mL|5×1.5mL

CS-01F97814

本制品是一种以纳米材料为基础的便捷的高效细胞转染试剂,达到甚至过了国际主流转染试剂的转染效果,并且转染过程无须任何孵育时间,实现了细胞转染的至简操作。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNARNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中,也可以用于活体动物的核酸转染以及用于基因治疗。

LP8000转染试剂的纳米技术可保证其瞬时转染和稳定转染时的可靠性和稳定性。

LP8000转染试剂使用特别便捷,无血清培养液和核酸及转染试剂可以直接混匀,质粒转染无需任何孵育时间,即可直接加入到细胞培养器皿内,实现了细胞转染的至简操作。

LP8000转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、通常观察不到细胞毒性,对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用,特别适用于难转染的贴壁细胞。LP8000转染试剂由于几乎完全没有细胞毒性,从而在转染后无需进行细胞培养液的更换,在转染24-48小时后直接收集细胞进行蛋白表达鉴定即可。

LP8000转染试剂经过对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3、人胚胎肾细胞HEK293/HEK293T、宫颈癌细胞Hela、结肠癌细胞HCT116、肝细胞HepG2和肺癌细胞A549等多种细胞的测试,转染效率和Thermo公司的Lipofectamine 3000 Transfection ReagentPromega公司的ViaFect Transfection Reagent相当,在一些细胞中甚至比Lipofectamine 3000ViaFect的转染效率更高。

LP8000转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染,也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。

LP8000转染试剂转染过表达质粒后,通常24-48小时后达到较高的蛋白表达水平,并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时;转染siRNA通常3-5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。

LP8000转染试剂转染细胞时,不受培养液中的血清和抗生素的影响,即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。
LP8000转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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