LP293转染试剂CS-01F97810_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
LP293转染试剂	LP293 Transfection Reagent	0.5mL\|1.5mL\|5×1.5mL	CS-01F97810

本制品是一种主要用于贴壁生长的HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等293系列细胞的基于新型阳离子脂质体的转染试剂。

LP293转染试剂对HEK293细胞系列的转染效率约70%以上，同时其具有细胞毒性低、重复性好、操作简单、转染后无需更换培养基以及成本低等突出优点。

LP293转染试剂也能用于其它贴壁细胞的转染，但转染效率远低于我公司的LP6000转染试剂(YT916)和LP8000转染试剂(YTB3200)。因此不太推荐使用LP293转染试剂用于293系列之外的细胞转染，仅当用于荧光素酶报告基因等检测灵敏度特别高的实验，并且用于一些比较容易转染的细胞时，才可以考虑使用LP293转染试剂。

LP293转染试剂转染时血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少避免很多阳离子脂质体因为需要在转染时去除血清而对细胞造成的损伤。

LP293转染试剂转染质粒进入贴壁培养的HEK293等293系列细胞后，通常在24-48小时后达到比较理想的蛋白表达水平。

LP293转染试剂的转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。

注意事项：

使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用我公司的质粒大量抽提试剂盒(YT003)进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。

转染前细胞必须处于良好的生长状态。

对于非293系列细胞，推荐使用我公司的LP6000转染试剂(YT916)或LP8000转染试剂(YTB3200)。对于悬浮培养的293系列细胞，推荐使用我公司的LP293S转染试剂(YTB3202)。

需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM Medium。

LP293转染试剂不能vortex或离心，可以用移液器轻轻吹打混匀或缓慢摇动混匀。

LP293转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。

本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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