基因型：

Δ(ara-leu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2(CamR，StrR，TetR)

操作说明：

1.取100μl冰上融化的Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42 回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5.为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

6.BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 μg/ml氯，以防质粒丢失。
7.具有卡那抗性，不能用于具有卡那抗性质粒的表达。