基因型：

D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3)F’[lac+lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2(CamR，StrR，TetR)

操作说明：

1.Rosetta-gami 2(DE3)菌株感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。