基因型：

C58(rif R)Ti pEHA105(pTiBo542DT-DNA)(strepR)Succinamopine

操作说明：

1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100μl感受态加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，用手管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3.加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。

4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50μg/ml kan，20μg/ml rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。

注意事项：

1.感受态细胞好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。