基因型：

C58 RecA(rif R/carbR)Ti pTiBo542DT-DNA(strepR)Succinamopine

操作说明：

1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100μl感受态加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，用手管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3.加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。

4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50μg/ml kan，20μg/ml rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。

注意事项：

1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4.浓度不应高于25μg/μl，过高的浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/ml kan，若所用平板含有20μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链或庆大可防止Ti质粒丢失，但链不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链或庆大，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。