操作方法：

1．取出感受态细胞，置于冰上5分钟，解冻。

2．向感受态细胞中加入1～10μl连接产物，轻弹离心管底部混匀，冰上放置30 min。

3．置于42℃热激60s后，迅速置于冰上急冷2分钟。

4．向热激完毕的感受态细胞中，加入700μl经37℃预热的LB(或SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡（225 rpm）培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5．室温4,000 rpm离心5分钟，弃去700μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。

6．将平板置于37℃培养，12～14小时后可出现菌落。

注意事项：

1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

2. 所有操作均需注意无菌操作。

3. pUC18 plasmid 标准品（0.2ng/μl），含有氨苄青抗性，作为阳性对照使用，每次转化5μl，可以得到约100～1000个克隆。
储存条件：-80℃可保存一年。