上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
脂质体转染试剂3000
型号:
CS-01F97752
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产品简介
脂质体转染试剂3000现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

脂质体转染试剂3000

Lipofectamine 3000 Transfection Reagent(

0.75ml|1.5ml

CS-01F97752

脂质体转染试剂3000包含了我们为先进的脂质体纳米颗粒技术,能够提供的转染性能,改善相关应用的结果及可重复性。此试剂具有优异的转染效率,并可提高细胞活性,广泛适用于难转染的及常见的细胞种类(例如HEK293Hela细胞)。

脂质体转染试剂3000专门针对难转染的细胞种类进行了优化,能够为广泛的细胞种类提供的转染性能。其可高效转染的细胞类型包括:成纤维细胞(3T3COS-7 成肌细胞(C2C12L6 CRL-1458),肝细胞(HepG2HuH7),红白血病细胞(K562),乳腺癌(MCF7Hs578T),前列腺癌(LNCap),肺癌细胞(A549NCI-H460),骨肉瘤细胞(U-2 OSSaos-2),结肠癌细胞(Caco2SW480),癌细胞(PANC-1),皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-28

对于常见的细胞种类而言,脂质体转染试剂3000试剂相比其他试剂具有更高的浓度和更低的用量,从而为客户带来更好的性价比。1.5mL规格产品即足以完成多1500次的转染反应(24孔板中)。

脂质体转染试剂3000的脂质体用量在很宽的动态范围内均能保持很高的转染效率,可按需进行简便快速的条件优化。在需要将细胞损伤降至低的相关应用中,建议使用低毒的脂质体用量(24孔板每孔使用0.75 μL)。

脂质体转染试剂3000适用于新型基因组编辑的相关应用。通过高效率的转染,它能够增加TALENCRISPR系统剪切和重组的成功概率,终使得基因修饰的效率实现大化,并简化后续处理步骤。

产品特点:

提供的性能:我们针对难以转染的细胞种类实现了高转染效率的试剂。

提高细胞活性:对细胞作用温和,毒性很低。

功能多样:同时适用于DNARNA及共转染应用。
保存条件:4℃,不可冷冻。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:脂质体转染试剂3000 0.75ml 1.5ml 

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