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产品名称:
LP2000转染试剂
型号:
CS-01F97582
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国产
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产品简介
LP2000转染试剂现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

LP2000转染试剂

LP2000 Transfection Reagent

0.5ml|1.5ml|5×1.5ml

CS-01F97582

本转染试剂是一种非常高效的新型转染试剂,达到了国际主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNARNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中,也可以用于活体动物的核酸转染以用于基因治疗。对于六孔板,一个包装的本转染试剂大约可以转染100个孔;对于24孔板,一个包装的本转染试剂大约可以转染500个孔。

LP2000转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性,并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。

LP2000转染试剂的使用方法和常用的Lipofectamine 2000 Reagent完全一致。并且经过对HEK293THelaNIH3T3HEK293FTCHO等细胞的测试,转染效率也和Lipofectamine 2000 Reagent相当甚至略高。

LP2000转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染,也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。

LP2000转染试剂转染过表达质粒后,通常2448小时后达到较高的蛋白表达水平,并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时;转染siRNA通常35天后对于目的基因的下调水平会比较理想。

LP2000转染试剂转染细胞时,基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响,即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得佳的转染效果,推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。

LP2000转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。

注意事项:

使用高纯度的DNARNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒,可以使用的质粒大量抽提试剂盒(YT003)进行抽提,以保证可以获得较高的转染效率。

转染前细胞必须处于良好的生长状态。

需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM培养液或普通的DMEM培养液。

LP2000转染试剂不能vortex或离心,宜缓慢晃动混匀。

LP2000转染试剂使用后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。

保存条件:
4℃保存。长期不使用可以-20℃保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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