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产品名称:
高保真血液直接扩增PCR Mix
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CS-01F97525
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产品简介
高保真血液直接扩增PCR Mix现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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高保真血液直接扩增PCR Mix

2×LoadEasy HF Blood Direct PCR MasterMix

20μL×100T|20μL×500T

CS-01F97525

介绍

 本产品是一种使用特别便捷的专门用于血液样品2倍浓度的高保真PCR预混液,并且PCR结束后可以直接上样电泳无需添加上样缓冲液。本产品含有耐血的BloodTaq高保真(high-fildelity) DNA聚合酶,这是一种经过基因工程改造的非常高效的并且具有高保真性的适用于EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血样品或干血斑样品直接PCR检测的耐热DNA聚合酶。

产品用途:

抗凝血样品基因组DNA中目的基因的直接扩增、基因分型(如基因缺失等)、血液样品中细菌、病毒等微生物感染的基因检测,以及基因敲除或转基因小鼠基因型分析。本产品含有的BloodTaq HF DNA PolymeraseBloodTaq DNA Polymerase相比,由于保真性更高,更适合用于血液样品中目的基因的扩增和克隆。

产品用途:

对于全血样品可以直接PCR检测,无须提取DNA

本产品对人、小鼠等全血中血红素等各种PCR抑制剂表现出的抗性,对于新鲜采集的、4℃保存或低温冻存EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝的人或小鼠血液样品或者干血斑(whatman903FTA采血卡上的干血斑),都无需进行DNA提取纯化,可以直接用于PCR扩增目的DNA

所需血样少,耐血能力高。

本产品用于20μLPCR扩增体系时,通常仅加入约1μL抗凝全血即可顺利完成PCR检测。用于检测细菌、病毒等微生物感染时,为获得高的检测灵敏度,20μLPCR扩增体系中大加入的血液量可以达到4μL,即20%体积,有些类型的抗凝血(例如人肝素抗凝血)大加入的全血体积可以达到10μL,即50%体积。

兼容EDTA、肝素或柠檬酸钠三种常见抗凝血。

血液样品用于PCR检测时,EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血都可以兼容的。如果希望取得佳的检测效果,优先推荐EDTA抗凝血。因为EDTA可以螯合多种核酸酶发挥酶活性所必须的金属离子,从而可以更好地抑制核酸的降解。

本产品提供了一对阳性对照引物,便于确认PCR检测效果。

该对引物是一种哺乳动物的通用引物,可以扩增SOX21基因上游非编码区约237bp DNA片段,也可用于大多数脊椎动物。
保存:-20℃,避免反复冻融。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:高保真血液直接扩增PCR Mix 20μL×100T 20μL×500T 

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