上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
高保真PCR预混液
型号:
CS-01F97518
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国产
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产品简介
高保真PCR预混液现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

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高保真PCR预混液

2×BalbFusion PCR MasterMix

20μL×100T|20μL×500T

CS-01F97518

本产品是一种使用了高保真、扩增速度可以达到15/kbBalbFusion DNA Polymerase的高保真PCR扩增用的2×预混液。本产品中含有2×BalbFusion DNA Polymerase2×BalbFusion Buffer (with Mg2+)2×dNTPs,只需加入适量引物、模板和水即可进行高保真PCR扩增。大大简化了PCR操作,使操作更加快捷,也减少了PCR操作过程中可能导致的污染,使PCR的重复性更好。

利用2×BalbFusion PCR MasterMix可以进行各种常规的PCR扩增,特别适合用于高保真和快速的定性和半定量的PCR扩增,以及长片段DNA(长度长可以过12kb)的基因扩增和克隆。

扩增速度极快,扩增小于6kbDNA片段时,延伸1kb只需要15秒。普通的DNA聚合酶延伸1kb通常需要12分钟。BalbFusion DNA polymerase由于其快的扩增速度,可以显著缩短PCR扩增所需的时间。

BalbFusion DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶,不仅可以非常高效地催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合反应,它同时还具有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity),它的错误发生概率比Taq酶要低52倍,比pfu酶要约低6倍。

BalbFusion DNA Polymerase的扩增长度长,可以达到12kbBalbFusion DNA Polymerase非常适合长片段DNA的扩增,扩增出来的片段可以轻松达到12kb,更长片段的扩增效果未经测试。BalbFusion DNA聚合酶可以轻松胜任具有复杂二级结构的、非常长的DNA片段的准确扩增,因此它是目的基因扩增和克隆的理想选择。

保存:-20℃,至少一年有效。适当避免反复冻融。如需频繁使用,可取适量存放于4℃,至少3天内有效。

注意事项:

由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列过1000万倍,在使用BalbFusion酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果,但仍宜适当避免反复冻融本产品,多次反复冻融可能使产品性能下降。

 

使用本产品前,一定要完全融化,并上下颠倒轻轻混匀后才能使用,尽量避免起泡。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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