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一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法) | ByFast One-Step Probe qRT-PCR Kit | 20μL×100T|20μL×500T | CS-01F97513 |
试剂盒是一种基于TaqMan等探针的用于一步法反转录实时荧光定量PCR,主要用于RNA的特异性高灵敏度定量检测。由于使用的探针一般是TaqMan探针,所以本方法也常称作TaqMan探针法。
本试剂盒以提取的RNA为模版,使用qPCR引物在同一反应管内连续进行反转录和荧光定量PCR,操作简单快速,大限度地减少人为误差,有效降低污染风险,节约PCR实验的操作时间,检测通量大。 本试剂盒整合了高效的BalbRT M-MuLV Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor和优异的抗体结合型热启动ByFast Taq DNA Polymerase,并优化了缓冲体系,反转录性能优、检测灵敏度高、扩增特异性、反应稳定性好,非常适合于內源低丰度RNA、外源病毒RNA等微量RNA的检测。 检测原理: 探针法qPCR不使用荧光染料如SYBR Green等对PCR产物进行荧光染色,而是采用了荧光基团和淬灭基团(quencher)标记的DNA探针靶向拟通过PCR检测的目标序列(设计的探针结合位点通常位于两条引物结合位点之间)。正常情况下,探针上的淬灭基团由于空间上的荧光共振能力转移(FRET)而导致荧光基团淬灭。在PCR反应扩增目标序列时,引物和探针都会退火到目标基因上,随着引物的延伸,Taq酶的5'→3'外切酶活性会导致结合在目标序列上的探针从5’端开始逐渐被降解。探针的荧光基团和淬灭基团被Taq酶切开后,淬灭基团的作用消失,荧光基团就能正常地被激发光所激发而产生荧光了。每经过一个PCR循环,就会有更多的荧光基团被释放,荧光度与新合成的目标片段数量成正比,从而就可以实现定量检测了。探针通常是目标序列特异性的一段线性DNA,5'端标记FAM或HEX等荧光基团,3'端标记BHQ1、TAMRA或MGB等荧光淬灭基团。 |
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