一步法RT-qPCR试剂盒（探针法)CS-01F97363_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
一步法RT-qPCR试剂盒（探针法)	QuickKing One Step RT-qPCR Kit（Probe)	50μl×50次\|50μl×200次	CS-01F97363

介绍

本试剂盒中的25×QuickKing Enzyme Mix为我司新型逆转录酶（King RTase)、新型抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶及RNase Inhibitor的预混Mix形式，其中的King RTase是分子改造后的新型逆转录酶，特别增加了疏水motif，具有更的RNA亲和性和热稳定性，提高了该酶的逆转录效率和对具有复杂二级结构RNA模板的延伸能力；PCR过程中采用了性能优良的新型热启动Taq DNA聚合酶，使得逆转录后的PCR反应具更高的扩增效率和特异性。另外，本产品中的2×QuickKing One Step Probe RT-qPCR Master Mix是专门为上述两种关键酶而优化的新型反应体系，其中包含必要离子组分、dNTPs以及PCR稳定剂和增剂，可保证King RTase和新型热启动Taq DNA聚合酶在整个一步法反应过程中发挥大功效。

本试剂盒是采用探针法（TaqMan,Molecular Beacon等)进行一步法RT-qPCR的专用试剂。使用本制品进行Real Time One Step RT-qPCR反应可在同一反应管内连续进行，操作简单，避免了样品间交叉污染的同时也提高了检测的灵敏度。

本试剂盒可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对多种高低丰度的靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。RT-qPCR技术可用于检测样本中目的基因表达水平及RNA病毒的含量。

产品特点：

·反应灵敏高效：性能优良的逆转录酶和Taq酶保证了极高的反应效率；

·操作简单快速：双组分的产品形式使得操作过程变得简单快速；

·解决复杂模板：通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板；

·样品普适性好：对不同物种来源及杂质较多的RNA模板的适用性高。
储存条件：-20℃保存，保质期1年。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：一步法RT-qPCR试剂盒（探针法) 50μl×50次 50μl×200次

热卖产品最新促销最新推荐

分子生物学试剂 > 核酸扩增 > 一步法RT-qPCR试剂盒（探针法)

产品简介

产品详情

一、概述：

联系我们