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产品名称:
lncRNA荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green)
型号:
CS-01F97361
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国产
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产品简介
lncRNA荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

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规格

货号

lncRNA荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green)

lnRsmart lncRNA qPCR kit

20μl×125|20μl×500

CS-01F97361

介绍

本试剂盒基于SYBR Green I嵌合荧光法的原理,可对目标lncRNA进行快速、特异性的定量检测。与mRNA相比,lncRNA具有丰度低、GC含量差异大、二级结构更复杂等特性,传统定量试剂对lncRNA难以达到理想的效果。 

本试剂盒中的2×lnRsmart lncRNA PreMix是专门为lncRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,其中的DNA聚合酶采用的是抗体修饰的热启动形式,配合特殊优化的Buffer体系,可确保本试剂盒在保证较高的反应特异性的情况下具有更高的检测灵敏度。此外,Buffer中添加了的H-competitor因子和EP组分,使得本试剂盒具有广泛的样本普适性,对不同GC含量的模板、具有复杂高级结构的模板、PCR抑制剂残留较多的模板以及长片段模板等具有非常好的扩增适用性,特别适合高级结构相对复杂,整体丰度相对较低的lncRNA的定量检测。此外,优化的预混液可缩短Real-Time PCR的反应时间,适用于标准或快速定量的PCR反应。

产品特点:

操作简便:2×lnRsmart lncRNA PreMix中预混有SYBR Green IPCR反应液配制时,只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行快速Real-Time PCR反应,操作简单方便。

普适性好:本试剂盒中特别添加了H-Competitor因子,能够竞争氢键、增双链的打开度,使本产品具有广泛的样本普适性,对具有复杂高级结构的模板和长片段扩增等具有非常好的适用性。

性能:本试剂盒特制的快速PCR Buffer体系含有独特的PCR稳定因子——EP,能够有效的保护酶活,抵御各种PCR抑制剂的干扰,保证了2×lnRsmart lncRNA PreMix具有高扩增效率、高扩增特异性、高扩增灵敏度和宽广的可信范围的特点。

定量准确:本试剂盒附带ROX Reference Dye,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,方便客户针对不同型号荧光定量PCR仪时选择对应浓度使用。
稳定性好:2×lnRsmart lncRNA PreMix采用无色透明管包装,经检测,光照不会影响体系的定量的结果。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:lncRNA荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green) 20μl×125次 20μl×500次 

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