上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > 核酸扩增 > 人miRNA上游引物
产品名称:
人miRNA上游引物
型号:
CS-01F97360
生产地址
国产
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产品简介
人miRNA上游引物现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

miRNA上游引物

Human miRNA Forward Primer

50μl体系×300

CS-01F97360

介绍

 microRNAsmiRNAs)是一类由1825核苷酸组成的非编码单链小分子RNA,具有表达的时序性、序列严格的保守性、组织器官表达量的相对特异性等特点,在细胞分化,生物发育及疾病发生发展过程中发挥巨大作用。

随着miRNA相关研究在迅速增加,为了方便客户,我们推出了miRNA引物系列产品。该引物数据库中为miRNA荧光定量检测的上游引物;所有引物库中的引物已经过验证。验证样本miRNA mimics,经过我司miRNA cDNA链合成试剂盒(WH0131)合成cDNA后,配合我司miRNA荧光定量检测试剂盒(WH0132)及试剂盒中的下游引物进行荧光定量验证。

使用方法:

本品为粉末状引物干粉,请根据说明书中标注的分子量使用RNA-free ddH2O进行溶解,配置成100μM的储存液,工作液浓度为10 μM

建议开盖前先短暂离心,轻启管盖,以免粉末损失。

溶解后的引物建议分装后保存,以免在操作中出现污染和反复冻融造成的不利影响。

溶解后的引物请在-20度冰箱中保存。

本试剂盒采用SYBR Green I嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。本试剂盒中的2×miRNA PreMix是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,其中的DNA聚合酶采用的是化学修饰的热启动形式,配合特殊的Buffer体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内进行准确定量。

试剂盒特点:

灵敏度高:可在pg级的总RNA中检测到目的miRNA

特异性:体系全新升级,更好的区分单碱基的差异,区分家族中的不同miRNA
通用性好:适用于各种类型的荧光定量PCR仪。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:人miRNA上游引物 50μl体系×300次 

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