上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
超高保真PCR反应预混液
型号:
CS-01F97357
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国产
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产品简介
超高保真PCR反应预混液现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

超高保真PCR反应预混液

HiFi PCR PreMix

1ml|5ml

CS-01F97357

介绍

 本制品是一种新型高保真PCR扩增预混液,适用于高通量测序文库的PCR扩增和其他PCR相关的克隆和检测。

扩增预混液中的Ultra HiFi DNA Polymerase是通过定向分子进化技术开发得到的新型快速高保真DNA聚合酶,增了DNA聚合酶对模板的亲和力,使得此酶在扩增速度和延伸能力上得到了提升,增加了PCR成功率和产物量。同时,此酶具有优良的3'- 5'外切酶活性(Proofreading活性),保真性可达市场上主流产品水平,保证了基因和文库扩增过程中的真实性。此外,本产品中的DNA聚合酶具有热启动(Hot Start)功能,可有效的控制低温情况下的非特异扩增和酶活损耗,进而保证了PCR扩增的特异性和稳定性。

本产品为一管式预混Mix形式,内含热启动型的Ultra HiFi DNA Polymerase、纯dNTPsMgCl2、反应缓冲液等PCR反应所需组分,只需加入模板和引物即可进行PCR扩增反应,操作简便。除此之外,预混Mix中还整合了PCR反应增系统,不但提高了预混Mix的稳定性,使得聚合酶对PCR反应抑制剂的耐受能力增,还提高了Ultra HiFi DNA Polymerase对不同GC含量模板的适应能力,使得本产品具有广泛的样品普适性和模板投入范围,将PCR反应的偏好性降至低。

产品特点:

·扩增快速:延伸速度可达10-15 sec/kb;延伸力:可扩增长至15 kbDNA片段;

·特异性好:具有热启动功能,可用于多重PCR

·灵敏度高:模板用量可低至10pg

·偏好性低:针对不同GC含量的模板都有均衡的扩增效果;
·应用广泛:可用于高通量测序文库的PCR扩增和其他PCR相关的克隆和检测。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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