荧光定量检测试剂盒（染料法)CS-01F97307_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
荧光定量检测试剂盒（染料法)	2×QuantSmart qPCR PreMix （SYBR Green)	20μL×125次\|20μL×500次\|20μL×5000次	CS-01F97307

本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂，可对目标DNA进行快速、特异性的定量检测。优化的预混液可缩短Real-Time PCR的反应时间，适用于标准或快速PCR仪。

2×QuantSmart qPCR PreMix采用了抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶，配合独特的qPCR Buffer体系可确保本产品在所有的Real-Time PCR仪上进行高灵敏的快速qPCR反应，qPCR反应时间可缩短50%。此外，Buffer中添加了的H-Competitor因子和EP组分，还使得本产品具有广泛的样本普适性，对具有复杂高级结构的模板、PCR抑制剂残留较多的模板以及长片段扩增等具有非常好的适用性。同时本产品还具有高扩增效率，高扩增特异性和宽广的可信范围等特点，在不影响PCR效果的前提下更快获得结果，节约科研时间和能源。

产品特点：

2×QuantSmart qPCR PreMix采用了抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶，配合特制的快速qPCR Buffer体系，可大大缩短变性、退火与延伸时间，可节省多达50%的反应时间，快速获得实验结果。

本产品中特别添加了H-Competitor因子，能够竞争氢键、增双链的打开度，使本产品具有广泛的样本普适性，对具有复杂高级结构的模板和长片段扩增等具有非常好的适用性。

本产品特制的快速PCR Buffer体系含有独特的PCR稳定因子——EP，能够有效的保护酶活，抵御各种PCR抑制剂的干扰，保证了2×QuantSmart qPCR PreMix高扩增效率，高扩增特异性、高扩增灵敏度和宽广的可信范围的特点。

2×QuantSmart qPCR PreMix中预混有SYBR Green I，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行快速Real-Time PCR反应，操作简单方便。

·本产品附带ROX Reference Dye，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，方便客户针对不同型号荧光定量PCR仪时选择对应浓度使用。
2×QuantSmart qPCR PreMix采用无色透明管包装，经检测，光照不会影响体系的定量的结果。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：荧光定量检测试剂盒（染料法) 20μL×125次 20μL×500次 20μL×5000次

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