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分子生物学试剂 > 核酸扩增 > 结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)
产品名称:
结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)
型号:
CS-01F97115
生产地址
国产
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产品简介
结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

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结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)

TB Typing Kit(VNTR-9)

50

CS-01F97115

本试剂盒是以分子流行病学新研究进展为基础,经工艺优化后形成的人型结核分枝杆菌基因分型产品。本产品利用结核分枝杆菌基因组中可发数目串联重复序列(variable-number tandem repeats,VNTR)多态性进行基因型分型区分临床菌株,是研究结核分枝杆菌分子流行病学和监测结核病传播状况的有力工具。不现有其它基于VNTR原理的结核分枝杆菌VNTR分型系统相比,这一分型系统对中国流行的菌株具有更的分辨能力,因此特别适合于中国用户的需求。

通过对各PCR反应引物序列和预混反应液成份进行精心优化,使得本试剂盒具有很的抗干扰力。不用户自配试剂相比,本产品显著提升了特异条带信号度,降低了使用粗制模板(煮沸菌液)时非特异条带的出现率,使实验操作更加简便、快捷的同时,提高了检测成功率。本产品的预混反应液化学稳定性良好,能有效抵抗反复冻融(10次)和较长时间(一周)的室温环境,更好地适应了用户检测工作中的灵活性需求。

本试剂盒将人型结核分枝杆菌(MTBC)鉴定、非结核分枝杆菌(MOTT)及模板质量鉴定、结核分枝杆菌北京家族菌株鉴定,和后续的9位点VNTR分型鉴定整合在一个试剂盒中,使用户仅需一个试剂盒、12PCR反应即可获得待测菌株基因型鉴定所需的完整信息。检测的分辨力指数(Hunter-Gaston indexHGI)可达0.989。并且,基因型鉴定结果可数字化记录,使得不同批次样本,不同地区,不同时间,不同研究者之间的实验数据可以很方便地进行比对和汇集分析,极大地提高了数据的使用效率。

对鉴定为VNTR-9基因型成簇(所有9个位点具有相同重复数)的样本,若要判定菌株间是否存在近期传播关系,需使用配套产品TB基因分型试剂盒HV-3,做进一步的分型鉴定。VNTR-9HV-3两个产品的结合使用可将检测的HGI提升至0.993。关于TB基因分型试剂盒HV-3产品的更多信息请见其产品说明书。
保存:-20℃保存一年

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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