上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
通用型全基因组扩增试剂盒
型号:
CS-01F97040
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国产
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产品简介
通用型全基因组扩增试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

通用型全基因组扩增试剂盒

Universal Whole Genome Amplification Kit

25

CS-01F97040

本产品是用于基因组DNA扩增全基因组的试剂盒,可以方便、简单、快速、经济的得到稳定产量的基因组DNA扩增样品。

产品特点:

基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和链取代能力。

可以扩增基因组达上万倍,具有高产量和高保真性的特点。

可使用各种来源的样品,包括全血,干血,发根,口腔粘膜刮液培养细胞,真菌和病毒等。

操作简便快捷,恒温(30℃)反应,无须PCR仪即可实现扩增。

产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异,微卫星差异,SNPSTR)等。

本产品适用于纯化好的基因组DNA

本产品只能用于科研。

保存:-20℃,有效期1年。

产品组成:

组分 规格

WGA溶液A 250μL

2×WGA溶液B 300μL

phi29 DNA聚合酶(10U/μL) 25μL

本产品是高效cDNA合成和PCR扩增的一步法RT-PCR试剂盒,用于以RNA为模板,通过特异引物合成cDNA之后,在DNA聚合酶的作用下通过PCR技术检测目标基因的含量。

产品特点:

实现一管式完成RT-PCR反应,避免样品交叉污染。

反应产物加入Loading Buffer后可以直接电泳检测。

本产品包含了cDNA合成以及PCR反应所必须的酶和反应体系,优化的Buffer体系大程度的减少了反转录酶对扩增反应的抑制,提高了反应整体的敏感性。

本产品足够5020μL体系的RT-PCR,只能用于科研目的。
保存:-20℃保存,有效期一年。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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