细胞可渗透钙离子荧光探针CS-01F97032_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
细胞可渗透钙离子荧光探针	Indo-1, AM,Cell Permeable	50μg\|5×50μg\|1mg	CS-01F97032

Indo-1是一种细胞生物学常用的钙离子荧光探针，与Fura-2为目前使用广泛的比率法测定的钙荧光指示剂，Indo-1能特异性地结合Ca2+，同时可发出荧光，结合Ca2+后的大发射波长从结合前的475nm向400nm（Ca2+饱和时）偏移，该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉：在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长激发该探针，在400nm和475nm的波长处分别检测结合钙离子和未结合钙离子的荧光信号，通过二者荧光度的比率测定钙离子浓度。

由于Indo-1是极性大的酸性化合物，无法进入细胞内，为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯，使其成为Indo-1/AM，该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷，极大的提高了细胞渗透性。在细胞内，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。

CAS：112926-02-0

分子式：C47H51N3O22

分子量：1009.91

Ex/Em：346nm/475nm

溶解性：溶于DMSO

储存条件：-20℃，有效期6个月

CAS：112926-02-0

分子式：C47H51N3O22

分子量：1009.91

Ex/Em：346nm/475nm

溶解性：溶于DMSO

储存条件：-20℃，有效期6个月

糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，高碘酸-雪夫技术是McManus在1946年先使用的，常用来显示糖原和其他多糖，而且还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。阿利新蓝和PAS技术联合使用可鉴别同一组织切片中的中性粘液和酸性粘液。

阿利新蓝（又称阿尔辛蓝、爱先蓝），是类铜钛花青染料，这种阳离子染料与酸性基团结合，即阿利新蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物，可将唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成蓝色。PAS技术可将中性粘液染成红色，由于阿利新蓝与雪夫试剂结合并发生反应，又将既含中性粘液又含酸性粘液的组织和细胞染成深浅不同的紫色。终，实验结果中酸性粘液物质呈蓝色，中性粘液物质呈红色，混合粘液物质呈紫红色，细胞核呈浅蓝色。

产品组份：

阿利新蓝染液（蓝色液体）————20 ml

高碘酸溶液（无色液体）—————20 ml

雪夫试剂（淡红色液体）—————20 ml

苏木素（紫红色液体）——————20 ml

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）试剂盒临用前前半小时取出恢复室温，用后应放回冰箱保存。

3）雪夫试剂染色时间不宜过长，一般组织变色后即可。

4）苏木素复染细胞核时应淡染，这样与阿利新蓝容易区别，也可以选择不染。
储存条件：室温，有效期36个月

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：细胞可渗透钙离子荧光探针 50μg 5×50μg 1mg

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