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碘化丙啶(PI)染液(即用型)
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CS-01F96992
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碘化丙啶(PI)染液(即用型)现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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碘化丙啶(PI)染液(即用型)

PI Staining Solution (Ready-to-use)

150T

CS-01F96992

 

本品是无菌的即用型PI染色液(溶于PBS),可进入死细胞内与DNA结合,并被活细胞排斥在外,适合用于流式细胞仪进行细胞活力分析。PI单染用FL2通道检测,若与FITCPE标记抗体/蛋白联合使用FL3通道检测。

碘化丙啶(Propidium IodidePI)是一种常用的细胞核荧光染料,作为一种溴化乙锭(EB)的类似物,能够嵌入碱基对之间实现与双链DNA结合。PI488 nm荧光激发,产生相对较大的斯托克司频移后,并在617 nm处具有大发射波长。另外,PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外,但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用以上特性,PI可作为细胞活力分析的荧光探针之一。不仅可单独使用;也可以同Calcein-AMHoechst 33258Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用,同时对活细胞和死细胞染色和鉴定。也能够与488 nm激发的荧光素如FITCPE等联合使用。

使用方法

1)收集细胞,计数,高以1 x 106 cells/100 μl的量加入FACS分选管;

2)加2ml PBS(或HBSS)清洗细胞,300 x g离心5 min,去上清。重复一次。

注:若需要用抗体标记表面抗原,可在此步之后进行。PI不适合与检测胞内分子的抗体联合使用。

3)细胞清洗后,用100 μl流式细胞染色缓冲液(flow cytometry staining buffer)重悬细胞;加入10 μl PI染色液,轻柔混匀,冰上或者室温避光孵育10-15 min

4)直接上机进行流式分析。注:PI染色后不可再清洗细胞。PI染色孵育后尽快上机检测。

注意事项

1)碘化丙啶(PI)是已知的诱变剂,操作过程中一定要做好防护工作避免与PI的直接接触。另外PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。

2)流式细胞染色缓冲液可配制如下:1×PBS (w/o Ca2+ and Mg2+) + 0.5-1% BSA(或 5% FBS)+0.1% 叠氮钠。也可根据实验室自身体系调整。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:4℃,有效期半年

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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