上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
油红O染色试剂盒
型号:
CS-01F96988
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国产
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产品简介
油红O染色试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

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油红O染色试剂盒

Oil Red O Stain Kit

50ml

CS-01F96988

本油红O染色试剂盒,其内的染液安全无毒,对人体无伤害。操作简单,性能稳定,显色清晰,且颜色对比鲜明且染色稳定。染色切片保存时间长且不易褪色

油性红OOil Red O)是一种脂溶性偶氮染料,是很的脂溶剂和染脂剂,能特异性地使组织和细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等染色。当组织切片置入染液时,染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂滴呈红色。用于分析细胞样品中脂质状况。油红O染色法,由于其观察性更好,染色更深,因此,目前已广泛的替代了其他脂质染色法,如苏丹III 染色法等。

油性红O染色试剂盒,主要用于病理状态下组织脂肪的检测。正常情况下,除脂肪细胞外其他细胞内一般不见或仅见少量脂滴。在病理状态下这些细胞中出现脂滴或脂滴明显增多,特别是在心、肝、肾等实质器官发生脂肪变性时,胞浆内出现大小不一的空泡,这时需用脂肪染色鉴定该空泡是否为脂肪变性;此外,脂肪染色还有其他多种用途:1)在动脉粥样硬化时,用脂肪染色可检测内皮细胞下的脂质沉着;2)显示脂肪栓塞栓子内的脂质,从而确诊脂肪栓塞;3)用于肿瘤组织的鉴别诊断,由脂肪组织所发生的肿瘤在与其他组织来源的肿瘤相区分时,可以借助脂肪染色,脂肪组织所发生的肿瘤,脂肪染色为阳性。

注意事项

1)封片时不可用油溶性封固剂封片,即千万不可用中性树胶封片,只可用本产品所携带的水性封固剂封片,否则会影响脂类染色效果;

2)封片时片子不宜太干,否则易起气泡,封片速度要快,防止凝固,发现有气泡时不宜压盖玻片驱赶,这会使脂滴移位,若气泡多,可用温水浸掉盖玻片后再封片。

3)乙醇、丙酮等脂溶剂均会影响对脂质的保存,不宜用作封固剂;

4)水洗时水流不可太大;

5)染色液染色之前,样本片尽量不要湿水;

6)切片时建议使用防脱载玻片,封片时建议使用免洗盖玻片;

7)做油红O染色时,冰冻切片要厚,一般为10-15μm,太薄的话脂肪会流失,可能造成假阴性结果;

8)配好的应用液需用慢速滤纸过滤,防止染色时有杂质;

9)油红O染色时应避免试剂挥发,否则易形成背景沉淀,样本不同具体染色时间会有差异,根据自己的染色结果进行调整;

10)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:室温,有效期12个月

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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