产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
氯离子荧光探针 MEQ (6-甲氧-N-乙基喹啉碘)(CoFM FACS) | MEQ(MQAE) | 10mg | CS-01F96972 |
MEQ(MQAE)是一个6-甲氧基花青苷衍生物,是细胞内的Cl-荧光指示剂,该染料可以通过受被动扩散所控制的碰撞淬灭来检测离子浓度。目前,检测Cl-所用荧光染料主要是MQAE 和SPQ,MQAE 相比SPQ 来说对于Cl-的浓度有更高的灵敏度和更高的荧光量子比率。
MQAE 的工作液可以配制于Krebs-HEPES 缓冲液中。Krebs-HEPES 缓冲液即为20mM HEPES,128mM NaCl,2.5mM KCl,2.7mMCaCl2,1mM MgCl2,16mM glucose,pH7.4。MQAE 标记细胞时的浓度通常为5-10mM。以约800-1000 万细胞每毫升的细胞密度,在含有5-10mM MQAE 的Krebs-HEPES 缓冲液中孵育30-60 分钟。通常一个探针的装载体系为100 微升即可。随后用Krebs-HEPES缓冲液或其它适当溶液洗涤5 次左右,即可进行相应荧光测定。详细的使用方法请参考相关文献。以下对胞内氯离子的荧光测量[Cl-]做简要说明计算。Stem-Volmer 方程可以给出氯离子探针的荧光度与氯离子浓度的关系: (FO/F) – 1 = KSV[Q] FO 是没有卤化物或其他淬灭离子时的荧光度,F 是有淬灭剂时的荧光度,[Q]是淬灭剂浓度,而KSV 是Stem-Volmer 方程常数。建议对实验体系进行校准,以得到研究用细胞类型的指示剂探针的Ksv,利用线性回归模型分析Stem-Volmer 方程。Stem-Volmer 方程中的氯离子Ksv 常数可以随着碰撞淬灭的阴离子物质的增多而明显降低,如多肽。便于校准,可以固定胞内氯离子的浓度,通过使用双三丁基氧化锡和尼日利亚菌素10~30μM。为了保证渗透压好使用阴离子不淬灭染料,取代氯离子,如葡萄糖酸。 |
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