上海莼试生物技术有限公司
热卖产品最新促销最新推荐
分子生物学试剂 > 核酸电泳和回收 > NadRed红色核酸染料
产品名称:
NadRed红色核酸染料
型号:
CS-01F96817
生产地址
国产
产品价格
电议
产品简介
NadRed红色核酸染料现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

NadRed红色核酸染料

2000× NadRed Nucleic Acid Red

1mL|5mL

CS-01F96817

NadRed红色核酸染料是一种EB (溴化乙锭)的升级换代产品,用于凝胶中DNARNA等核酸的染色。NadRed具有安全(致突变性极低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点,凝胶中的核酸在使用本产品染色后用适当紫外灯(300nm左右波长)检测呈现红色荧光,适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统。

NadRedEBSYBR Green更安全。NadRed在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明,NadRed的诱变性远小于EBEB在多种致突变测试中呈现很的诱变性,而NadRed仅仅在浓度高达20微克/毫升时,并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性。通常NadRed在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升,大大低于可导致诱变的浓度。NadRed和的另外一种安全型核酸染料NadGreen,由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞,从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜,进入活细胞并染色DNA,并且有报道SYBR Green可以烈增紫外线诱导的基因突变。

NadRed的使用方法和EB一致。NadRed可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶,也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便,而后者灵敏度要更高一些。但由于NadRed本身已经非常灵敏,通常采用把NadRed直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊情况,如核酸样品量特别少的情况等,则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。

本制品可室温保存,至少两年有效。

NadRed对于核酸的迁移率影响非常小,小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。

通过凝胶回收试剂盒或酚氯仿抽提,可以有效去除与DNARNA结合的NadRed,从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。

注意事项:

制备好的NadRed琼脂糖凝胶,在4℃避光条件下通常可以保存3-5天。

NadRed琼脂糖凝胶再次熔化使用时,为取得更好的观察效果,需要添加适量NadRed

电泳之后的凝胶不建议重复使用。

电泳后再使用NadRed染色的凝胶一般不需要脱色。如果发现背景太高,可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。

NadRedNadGreen除了可以染色双链DNA外,也可染色单链DNARNANadRed对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。NadRed对单链核酸的染色灵敏度约为NadGreen5倍。

如果使用聚丙烯酰胺凝胶,请使用浸泡染色法染胶,并延长染色时间至30分钟-1小时。

如果观察到条带弥散或者分离不理想,建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题,说明与染料无关,请尝试以下方法:使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。

本产品兼容常用的电泳缓冲液,例如TAETBE
NadRed不属于有毒有害物质,并通过了环境安全相关测试,相关废弃物无需特殊处理,可以参考常规化学试剂进行处理。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:NadRed红色核酸染料 1mL 5mL 

联系我们

联系人:高小姐

手    机:13585831301

Q      Q:3004967995

座    机:021-59541103

传    真:021-60443211

地    址:上海嘉定区嘉罗公路1661