EB染色液CS-01F96776_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
EB染色液	EB staining solution	10ml	CS-01F96776

本品是EB的水溶液，浓度为10mg/ml。EB(溴化乙锭)能与核酸分子特异结合，用于观察琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中DNA或RNA分子。广泛应用于核酸电泳前后的染色以及流式细胞仪的样品染色处理等。溴化乙锭(Ethidium Bromide；C21H20N3Br；分子量为394.32)含有一个可以嵌入DNA 碱基的三环平面基团。它与DNA 的结合没有碱基序列特异性。大约每2.5 个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，紫外激发后呈现荧光，可以检测到10ng 的DNA 条带。

使用方法：

使用前，先离心快甩EB溶液至管底，以防开盖后EB造成的污染。

琼脂糖电泳凝胶的制备及染色(预染法)：

1. 按照所需浓度称取琼脂糖，加入TAE或TBE缓冲液，在微波炉中加热至彻底溶解。

2. 等凝胶温度降至大约50-60℃以下时，加入10 mg/ml EB溶液至终浓度为0.5μg/ml (如100ml凝胶加入EB量为5μl)；彻底摇匀后铺胶并插入梳子。

3. 凝固后，将梳子轻轻拔出。

4. 上样电泳，电泳结束后紫外观察。

琼脂糖电泳凝胶的制备及染色(后染法)：

1. 按照所需浓度称取琼脂糖，加入TAE或TBE缓冲液，在微波炉中加热至彻底溶解。

2. 等凝胶温度降至大约50-60℃以下时，不要加入EB溶液，直接铺胶并插入梳子。

3. 凝固后，将梳子轻轻拔出。

4. 上样电泳。

5. 电泳结束后将凝胶浸泡在含有EB的TAE或TBE染色液中(染色液配制：100ml 缓冲液中加入150-200μl EB溶液，混匀)染色15-20分钟；TAE或TBE缓冲液中脱色10-15分钟。

6. 紫外观察结果。
储存条件：室温避光。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：EB染色液 10ml

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