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产品名称:
红色荧光核酸染料
型号:
CS-01F96775
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产品简介
红色荧光核酸染料现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

红色荧光核酸染料

GelHong nucleic acid gel dye

500μL

CS-01F96775

 GelHong核酸红色荧光染料是一种可以替代溴化乙锭(EB)的红色荧光核酸染色剂。与SYBREB相比,GelHong显著的特性是其在多种条件下的高灵敏性和稳定性。另外相对EBSYBRGelHong诱导突变的能力极低。

保存:48℃,有效期两年。室温避光可保存6个月。

使用方法:

染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。

GelHong预染方法(推荐):

GelHong试剂按1:10000溶于琼脂糖凝胶溶液中,充分混匀。例如:将5μL GelHong试剂加入到50mL凝胶溶液中。

注意:由于GelHong具有出色的热稳定性,可将试剂直接加入高温的凝胶溶液中,而不用等凝胶溶液冷却后再加入。

浇制凝胶并使其凝固后上样电泳。

注意:使用这种预先加入染色剂的琼脂糖凝胶,每次不易加入太多的DNA样品,否则容易造成饱和现象,可以做多个不同浓度的DNA Marker,以确定佳DNA上样量。

紫外下观察结果。

注意:如果始终出现拖尾或是条带无法分离的现象,您可以使用后染法对DNA染色,以确认问题是否与染色剂有关。如果使用后染法问题依旧存在,则说明问题与染色剂无关,请尝试减少核酸的上样量后进行电泳。

GelHong后染方法:

H2OGelHong稀释约3300倍到0.1M NaCl中,制成3X染色溶液。例如:将15μL GelHong5mL1M NaCl加入到45mL H2O中。

注意:GelHong 1X染色溶液同样可用于后染,但其灵敏度要低于3X染色溶液。

将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3X染色溶液浸没凝胶。

在室温下轻轻地摇动凝胶板,佳的染胶时间为30分钟,这取决于凝胶板的厚度、琼脂糖或聚丙烯酰胺的浓度和DNA的长短。凝胶越厚或琼脂糖的浓度越高,染色所需要的时间就越长。
注意:染色溶液至少可重复使用23次。如果不是立即再用的话,建议将用过的染色溶液冷藏保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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