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产品名称:
Goldview核酸染料(10000×)
型号:
CS-01F96773
生产地址
国产
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产品简介
Goldview核酸染料(10000×)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

Goldview核酸染料(10000×)

Goldview Nucleic Acid Gel Stain (10,000×)

1ml

CS-01F96773

GoldView是一种可替代溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA 时,其与DNA发生结合并产生很的荧光信号,灵敏度与 EB 相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈现红色荧光。GoldView特别适合大片段(>1 kbDNA的检测,灵敏度高。也可用于RNA的染色。

使用方法

1 100 ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%-2%)在微波炉中融化。

2 加入5-10 μl GoldView(若背景过高可以适当减少用量;若灵敏度过低,可以适当增加用量),轻轻摇匀,避免产生气泡。

3 冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。

4 电泳完毕,使用凝胶成像系统或可见光透射仪观测。注:若使用凝胶成像系统照相时,通过调节光圈、曝光时间选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。

注意事项

1 胶厚度不宜过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。

2 加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响。

3 GoldView特别适用于大片段(>1 kbDNA的检测。对于更小片段的DNA,特别是<500bp检测信号可能很弱或者无信号。对于<500bpDNA染色,建议使用SYBR Green I 核酸染料。

4 GoldView的凝胶不适合进行胶回收实验。

5 Goldview的主要成分是吖啶橙,具有细胞渗透性,有一定的细胞毒性。建议操作人员使用时做好防护措施,带上手套和口罩。并妥善处理好废弃物。

6 另提供无毒的EB替代物-Dured核酸染料(SY0244),烈推荐使用。

7 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:RT

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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