上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 质粒快速小提试剂盒(0.6~3mL)
产品名称:
质粒快速小提试剂盒(0.6~3mL)
型号:
CS-01F96666
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国产
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产品简介
质粒快速小提试剂盒(0.6~3mL)现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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英文名称

规格

货号

质粒快速小提试剂盒(0.63mL)

QuickPure Plasmid Mini kit(0.6-3mL)

200

CS-01F96666

本试剂盒操作简单快速、提取量高。整个提取过程不过10分钟,不需要离心收集细菌和重悬菌体,直接在培养好的菌液中加入独特的裂解液Buffer L2,随后中和、离心过柱,提取出的质粒可高达30μg,并大限度去除蛋白质、基因组等其它杂质。提取出的质粒DNA可直接用于细菌转化、酶切、PCR、体外转录、测序等其它下游实验。

保存条件:室温(1530)

自备试剂:无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项:

本试剂盒可在干燥、室温(1530℃)环境下保存1年,如需保存更长时间可将离心柱置于28℃。

次使用前,将RNase A溶液全部加入到Buffer N3中,混匀,置于28℃保存。

次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

使用前若Buffer L2有沉淀,请置于37℃水浴中不断混匀直至溶液变澄清方可使用。

操作步骤:

600μL细菌培养液到1.5mL离心管(自备)中。

向上述离心管中加入100μL Buffer L2,温和地上下颠倒溶液8次,溶液应由浑浊变为澄清的紫色,表明裂解完全。裂解时间不应过2分钟。

向上述离心管中加入350μL Buffer N3(请先检查是否已加入RNaseA),立即上下颠倒约810次充分混匀,此时溶液应完全变为黄色并有黄色沉淀形成。13000rpm离心23分钟。

将步骤3中所得上清液缓慢倒入已备好的吸附柱吸附柱DM中,避免沉淀进入吸附柱。

13000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

向吸附柱中加入150μL Buffer PB13000rpm离心15秒。

向吸附柱中加入400μL Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)13000rpm离心1分钟。

 

将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位加入30100μL Buffer EB13000rpm离心1分钟,收集质粒DNA,-20℃长期保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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