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产品名称:
核酸助沉剂
型号:
CS-01F96665
生产地址
国产
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产品简介
核酸助沉剂现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

核酸助沉剂

Glycogen(20mg/mL)

0.7mL

CS-01F96665

本产品为分子生物学级Glycogen(糖原),不含DNase,不含RNase,可以用作沉淀DNARNA的辅助沉淀剂。作为DNARNA的辅助沉淀剂,大多数情况下glycogentRNA或声处理过的DNA效果更好。由于glycogen中不含DNARNA,因此用glycogen作为辅助沉淀剂沉淀下来的核酸更适合于后续的PCRRT-PCR以及内切酶等核酸酶反应。而tRNA或声处理过的DNA作为辅助沉淀剂有时会干扰PCRRT-PCR以及内切酶等核酸酶反应。据文献报道,连接反应产物用glycogen沉淀后对于后续的细菌转化没有干扰,0.001mg/ml glycogen不会抑制TdT,浓度不大于2mg/mlglycogen不会影响反转录酶的活力,0.02mg/ml glycogen不会抑制T4 RNA ligaseGlycogen会干扰DNA和蛋白的相互作用。通常1微升Glycogen (20mg/ml)即可把少至皮克(pg)级的DNARNA1毫升的溶液体系中沉淀出来。每个包装至少足够沉淀350个常规量的DNARNA样品。

操作步骤:

在待沉淀的DNARNA样品中加入1微升Glycogen (20mg/ml),混匀。对于特定的实验操作,糖原的用量可以参考文献或特定的操作说明进行。

根据实验需要采用乙醇或其它方法沉淀DNARNA

加入乙醇等沉淀试剂,混匀,12,000g左右离心10分钟,即可得到核酸和glycogen的共沉淀物。如果要求尽量沉淀完全,在加入乙醇等沉淀试剂并混匀后,可以-20℃或-80℃冻存数小时或过夜后再离心。

注意事项:

通常每个样品加入1微升Glycogen(20mg/ml)即可,对于已知糖原可能对后续反应有干扰的情况,可以适当减少糖原用量,或使用本公司另外一款核酸助沉剂或者tRNA等作为辅助沉淀剂。

 

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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