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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 通用型质粒小量抽提试剂盒(3mL)
产品名称:
通用型质粒小量抽提试剂盒(3mL)
型号:
CS-01F96664
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国产
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产品简介
通用型质粒小量抽提试剂盒(3mL)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

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通用型质粒小量抽提试剂盒(3mL)

Universal Plasmid Mini Preparation Kit(3mL)

50|200

CS-01F96664

本试剂盒是一种用于从大肠杆菌中进行小量质粒快速抽提的通用型离心柱式试剂盒。

本试剂盒不仅适用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109XL-1 blue等,也适用于EndA+菌株如JM110BL21(DE3)TG1HB101等,能有效避免EndA+菌株中高丰度核酸酶的污染,并适用于从糖类修饰水平高的野生菌株中提取质粒。

保存条件:室温保存,一年有效。

注意事项:

次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I (悬浮液)中,混匀,并在瓶上做好标记。加入RNase A4℃存放。

次使用前请根据说明书和瓶上的标示,在溶液IV (洗涤液)中加入相应体积的无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。

注:

50次规格的溶液IV (洗涤液)次使用前每瓶加入27mL无水乙醇;

200次规格的溶液IV (洗涤液)次使用前每瓶加入54mL无水乙醇。

温度较低时,溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀,37℃水浴加热溶解,混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀,否则会产生大量气泡。

溶液II使用完后,一定要盖紧瓶盖,防止被空气中二氧化碳酸化。

溶液II有碱性,溶液II、溶液III、溶液PB和溶液IV对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。

废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

 

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:通用型质粒小量抽提试剂盒(3mL) 50次 200次 

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