上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
柱式DNA纯化回收试剂盒
型号:
CS-01F96662
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国产
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产品简介
柱式DNA纯化回收试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

柱式DNA纯化回收试剂盒

Reclean Column DNA Cleanup Kit

50T|250T

CS-01F96662

本试剂盒是一款快速可靠的的纯化试剂盒,可从酶学反应中纯化和浓缩高达5μg例如PCR、酶切、连接和反转录产物。该方法减少结合、漂洗和洗脱过程中的温育和离心时间,5分钟之内即可完成纯化实验。DNA纯化结合缓冲液用于稀释样本以确保DNA在高盐环境下结合到专有的二氧化硅基质上。DNA纯化漂洗缓冲液将酶、短链引物(≤40nt)、变性剂和其它小分子量的反应成分(如核苷酸,DMSO,甜菜碱)去除,从而实现更低体积的洗脱,得到高浓度高纯度的DNA

本试剂盒洗脱得到的DNA可以用于限制性酶切、DNA测序、连接反应和其它酶学等下游实验。

产品特点:

洗脱体积低至6μL

优化设计过滤柱防止缓冲液和盐分残留。

流程优化,试验速度快至5分钟完成DNA纯化实验。

产品应用:

PCR产物纯化

有效去除PCR产物DNA中的聚合酶、引物、洗涤剂、dNTPs等。

酶切反应纯化

有效去除限制酶及各种修饰酶(如连接酶、激酶、核酸酶、磷酸酶),对DNA样品脱盐和浓缩。

cDNA纯化

有效去除反转录酶和聚合酶以及核苷酸。

标记纯化

有效去除未结合的放射性标记或荧光标记的核苷酸。

质粒纯化

可用于纯化和浓缩质粒,有效去除抑制剂及不必要污染物。

寡核苷酸纯化

 

可用于纯化单链DNA寡核苷酸(18nt)dsDNA片段(15bp),可有效去除小的寡核苷酸(612nt)。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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