上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)
产品名称:
病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)
型号:
CS-01F96613
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国产
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产品简介
病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

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规格

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病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)

Virus DNA/RNA Extraction Kit In ten minutes

50T

CS-01F96613

本试剂盒采用独特的裂解液,可快速可靠的从粪便、淋巴液、血清、血浆样本中纯化出高纯度的病毒DNA/RNA。本试剂盒操作简单、快速,10分钟即可获得高纯度DNARNA,可应用于各种病毒DNA/RNA核酸提取,如各HCVHIVHPV、动物致病性病毒等。应用本试剂盒提取的DNA/RNA可直接用于反转录、One-Step RT-PCR、文库构建等多种分子生物学实验。

储存:室温避光保存,可保存2年。

1.本试剂盒中的Washing Buffer中已经加乙醇,无需单独添加。

2Virus DNA/RNA LB1,储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。

3.蛋白酶K20mg/ml)长期保存请储存于-20℃,短期室温保存(6个月),其它组分储存于室温。

特点:

1.仅需10分钟即得到高质量病毒DNARNA

2.操作简单,无有机抽提或乙醇沉淀。

3.重复性,产量高。

4.完全去除污染物和抑制剂,方便下游应用。

操作方法:

1.在1.5mL离心管(自备)中加入200μL病毒液(粪便提取液、血清、血浆等),加入50μL Virus DNA/RNA LB1 20μL 蛋白酶 K,漩涡混合均匀,室温消化 5分钟。

2.消化完毕后,向上述样本中加入700μL Virus DNA/RNABB2,漩涡混合 1分钟。

3.将上述混合液全部倒入到吸附柱中,13000rpm离心1分钟。

4.倒掉废液。向吸附柱中加入500μL Washing Buffer13000rpm离心15s。重复此步骤一次。

5.将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心1分钟,将残留的乙醇彻底甩干。

 

6.将吸附柱芯放入到 1.5mL RNase-Free 收集管中,向吸附柱芯中加入30~80μL Nuclease Free13000rpm离心1分钟,洗脱液即为 DNA/RNA 产物,冷冻保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟) 50T 

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