注意事项：

使用Washing Buffer(洗涤液)时应加入80mL无水乙醇并混匀，请及时做好标记，使用Buffer A时应加入0.5mL的RNase A并做好标记。

如Buffer B出现沉淀，可50℃加热处理至沉淀溶解后仍可使用，不影响试验结果。

操作方法：

取过夜培养的菌液1.8mL加入到2mL EP管中，13000rpm室温离心1min后收集细菌沉淀。倒掉上清液，可再次加入菌液1.8mL，离心后去除上清液。

每管加入250μL Buffer A（确认已经加入RNase A），用吸头吹打沉淀菌体至无可见细菌团块，以确保沉淀完全散开。

每管加入250μL Buffer B，轻轻颠倒离心管4～6次，室温放置2分钟，使细菌完全裂解，溶液应变的透明。切勿剧烈振荡，否则会导致基因组DNA断裂，从而导致所得质粒被基因组DNA污染。

每管加入350μL Buffer C，随即颠倒离心管4～6次混匀(切勿剧烈振荡)，可见白色絮状物产生，室温静置1min。

手腕用力上下振荡4～6次，使白色絮状物振散，然后置于离心机上13000rpm室温离心10min。

将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内，13000rpm离心30s，倒弃收集管内液体。(切勿吸入白色沉淀，否则会堵塞离心柱)。

在质粒纯化柱内加入500μL Washing Buffer(务必确认已加入无水乙醇)，13000rpm室温离心30s，洗去杂质，倒弃收集管内液体。

重复步骤7一次。

将吸附柱重新放入套管中，13000rpm室温空离心2min。

将质粒纯化柱置于新的1.5mL离心管上，静置2min，使痕量乙醇完全挥发，加入80～120μL Elution Buffer至管内柱面上，放置1min。Elution Buffer使用前好50℃水浴预热。

13000rpm室温离心2min，所得液体即为高纯度质粒。