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植物基因组DNA高效提取试剂盒 | High efficiency extraction kit for genomic DNA from Plant | 50次|200次 | CS-01F96604 |
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的裂解缓冲液系统,能够高效提取多种不同植物组织中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA,可大限度去除杂质蛋白。独特的裂解缓冲液可以高效裂解植物细胞,大限度的保护DNA的完整性,提高基因组DNA浓度。提取的基因组DNA片段大,纯度得率高,质量稳定可靠。提取的基因组DNA适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、高通量测序,芯片杂交以及Southern杂交等下游实验。
试剂盒特点: 1.简单快速:1小时内即可获得纯的基因组DNA。 2.应用广泛:适用于各种植物组织。 3.纯高效:高效获得的DNA纯度高,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。 保存条件:室温(15-30℃)干燥条件下可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。在2-8℃保存条件下,若产生沉淀,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。 注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项) 1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 2.缓冲液FGA可能发黄,并不影响提取效果。 3.若缓冲液FGA或LP2有沉淀析出,可在37℃水浴溶解,摇匀后使用。 4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。 |
实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。