上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 质粒快速提取试剂盒(1~4mL)
产品名称:
质粒快速提取试剂盒(1~4mL)
型号:
CS-01F96596
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国产
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产品简介
质粒快速提取试剂盒(1~4mL)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

质粒快速提取试剂盒(14mL)

MicroPlasmid Rapid Extraction Kit(1-4ml)

50|200

CS-01F96596

本试剂盒对传统的碱裂解法进行了优化,可以在8min内获得高质量质粒DNA。优化的裂解液可以使得离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取14mL过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

产品特点:

快速:步骤少,操作简单,仅需8min

高效:可提取菌体85%以上质粒DNA

配备了独特的IndRed,可以清晰辨明抽提过程中样本的裂解程度,确保得到高效率、高纯度的质粒DNA

保存条件:室温(1525)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于28℃。28℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min以溶解沉淀。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月。加入RNase AIndRed后的溶液P1应置于28℃保存,可稳定保存6个月。

注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)

溶液P1在使用前先加入RNase AIndRed(将试剂盒中提供的RNase AIndRed全部加入),混匀,置于28℃保存。

使用前请先检查溶液P2P5是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。

注意不要直接接触溶液P2P5,使用后应立即盖紧盖子。

所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12000rpm ~13400×g)

提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。

IndRed的使用:IndRed是一种指示剂,用以指示整个操作的正确性,对人体无害。使用时按照IndRed:溶液P1=1:200进行混合,彻底颠倒混匀,混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀,由于菌体的存在,混匀后的溶液为浑浊的红色;添加溶液P2之后彻底混匀后,溶液的颜色为澄清的紫色,则说明充分裂解;再添加溶液P5至彻底混匀后,溶液为澄清的黄色,说明中和复性充分。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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