产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
酵母质粒小量提取试剂盒(1.5~5mL) | Yeast Plasmid Mini Kit(1.5-5mL) | 50次 | CS-01F96591 |
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合lyticase特异消化酵母细胞壁,能在1小时内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒特点: 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 快速、方便,不需要使用有毒的、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 保存:室温储存12个月不影响使用效果。 注意事项: 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。 溶液YP3和去蛋白液PD中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 通常酵母质粒拷贝数都很低,高拷贝质粒大得率一般为每5mL培养物提取1μg左右的质粒。用于下游试验时通常建议使用量为: 用于转化大肠杆菌,选择高效率的感受态细胞 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本螺旋可以过90%。 用户需要自备Sorbitol buffer(1M,0.1M Na2EDTA,14mMβ-巯基乙醇)。 配制方法:在600mL去离子水里面溶解182.2克,加入200mL 0.5M Na2EDTA (pH8.0),不需要调节PH值,定容到1L,4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。 菌体浓度检测一般OD600值为1的时候,酿酒酵母细胞是1~2×107 cells/ml,由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD值变化也很大,以上仅供参考。
洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。 |
联系人:高小姐
手 机:13585831301
Q Q:3004967995
座 机:021-59541103
传 真:021-60443211
地 址:上海嘉定区嘉罗公路1661