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无内毒素质粒中量提取试剂盒(40~60mL) | Plasmid | 20次|40次 | CS-01F96590 |
本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA,采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂,只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质,获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右,得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在1.5mL小离心管中操作,方法简单,不需特殊设备,无需过柱,不用酚氯仿抽提;基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒,不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA,对质粒损伤小,即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或大型BAC/PAC质粒,只要碱裂解法能够提取,就可以有效纯化。可选择任意小体积溶解质粒,浓度可高达5μg/μl。螺旋比例可高达95%,无内毒素,转染效果好。
试剂盒特点: 不需要使用有毒的,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速、方便、从50~70mL大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中,可快速提取100~250μg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80~90%。 获得的质粒产量高,浓度高,螺旋比例高,纯度好,可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 内毒素含量极低(<0.1 EU/μg DNA),可直接应用于细胞转染。 保存:室温储存12个月不影响使用效果。 保存事项: 次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg/ml)置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会混杂有微量RNA残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 内毒素清除剂在4℃可保存一个月,如果要长期保存,建议保存在-20℃! 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项: 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。 提取大质粒时操作动作要轻柔,应该使用剪大了开口的吸头,防止机械剪切对DNA的损坏。 DNA沉淀液沉淀离心后,可能看不到明显沉淀。如未见沉淀,担心DNA丢失,可保留上清液,待完成全部操作后电泳鉴定,以确定是否获得终产物(数百微克DNA离心沉淀在管的侧壁上,可能无法看到明显团块)。 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本螺旋可以过95%。
质粒DNA确切分子大小,必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者螺旋状态的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道确切大小。 |
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