试剂盒特点：

离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

不需要使用有毒的、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、方便，从100～300mL大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.5～2mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80%以上。

获得的质粒产量高、螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

保存：室温储存12个月不影响使用效果。

保存事项：

次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：

① 次使用前请先在漂洗液WB瓶和去蛋白液PE瓶中加入量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

② 将RNase A全部加入溶液P1中，混匀。每次使用后置于2～8℃保存。

取150～200mL (多不过300mL)过夜培养的菌液，12000×g（约10000rpm），离心1～2分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。

收集过50毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个50mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。

用7.5mL溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。

如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

加7.5mL的溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解，室温放置4～5分钟。

温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

加7.5mL溶液N3，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。12000×g离心10～15分钟，小心取上清至新管，避免吸取到漂浮的白色沉淀。

加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。

向上清中加入0.5体积异丙醇（约10mL）后充分颠倒混匀后分多次（每次不过15mL）转入吸附柱DC中（吸附柱放入收集管中），12000×g离心1分钟，倒掉收集管中的废液。直到所有混合溶液通过此吸附柱。

加入10mL去蛋白液PE（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000×g离心1分钟，弃掉废液。

此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质，如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌

株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应加此步骤；如所用菌株为XL-1 Blue、0和DH5α等缺陷型菌株，核酸酶含量低，则可略过此步骤。

加入10mL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000×g离心1分钟，弃掉废液。再加入10mL漂洗液WB，重复漂洗一次。

将吸附柱DC放回空收集管中，高速（好大于12000×g）离心2分钟以干燥基质膜上残留乙醇。

该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率，降低质粒产量。

取出吸附柱DC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加1～2mL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65～70℃水浴中预热可提高产量），室温放置2分钟，12000×g离心1～2分钟。

推荐：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1分钟，12000×g离心1～2分钟。洗脱两遍可提高浓度约10%。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量（小不应少于1mL）。