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产品名称:
寡核苷酸纯化回收试剂盒
型号:
CS-01F96582
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国产
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产品简介
寡核苷酸纯化回收试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

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规格

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寡核苷酸纯化回收试剂盒

Oligonucleotide purification kit

50

CS-01F96582

介绍 

 本试剂盒使用特殊的结合缓冲液能够高效纯化>15nt的单链或者双链DNARNA。特别适用于从标记反应(标记,同位素标记,标记等)混合物中回收小片段标记探针,去除未反应的核苷酸、短oligos、染料、酶、盐离子等。典型的回收率高达8090%,每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10μg。使用本试剂盒回收的RNA或者DNA可适用于in Situ HybridizationNorthern blotRNAiGel shift assayLigationSequencingMicroarray analysis等实验。

产品特点:

离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。

使用了优质结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

独特的配方保证了该试剂盒比一般试剂盒回收效率大大提高。并且适用于回收单链或者双链DNARNA

快速、方便,不需要使用有毒的、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。

保存事项:

室温保存,有效期12个月。避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

平衡液:

介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。

什么情况下使用:一般刚买来2,3个月的新硅胶柱子不需要使用平衡液。时间存放较长吸附效率降低的硅胶柱子,可使用平衡液进行预处理来提高硅胶柱子结合能力从而提高核酸产量。或者预期片段难回收,或者回收起始量低预期产量低的情况,也可使用平衡液来提高回收效率。

使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取100μL的平衡缓冲液至柱子中。13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

操作步骤:

提示:次使用前请先在漂洗液RW中加入量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

估计样品体积(低体积50μL,不够可用灭菌水补足;回收RNA需要用RNase free H2O补足),向其中加入10倍体积的结合液OB,温和地充分混匀(PCR反应体系无需去除石蜡油或矿物油)。

回收>100bp片段时候,只需要加5倍体积结合液OB

将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12000rpm离心3060秒,倒掉收集管中的废液。

吸附柱大容积为720μL,若溶液体积大于720μL,可分批加入。

加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30秒,弃掉废液。

加入500μL漂洗液RW12000rpm离心30秒,弃掉废液。

将吸附柱EC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加3050μL RNasefree H2O,室温放置2分钟,12000rpm离心1分钟。如果需要较高浓度核酸,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。

洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要核酸浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是小体积不应少于25μL,体积过小降低核酸洗脱效率,减少产量。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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