产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
PAGE胶DNA纯化回收试剂盒 | PAGE DNA Extraction Kit | 50次 | CS-01F96581 |
介绍
本试剂盒采用新型硅基质膜离心柱及特殊的缓冲液系统,可从聚丙烯酰胺凝胶中简捷高效回收20bp~500bp的短片段DNA片段,回收效率可高达85%。并可大限度去除杂质,获得高纯度的DNA,所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。
产品特点: 适用范围广泛,可以回收20bp~2kb的单链或者双链DNA。 使用了优质结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。 独特的配方保证了该试剂盒比一般试剂盒回收效率大大提高。 快速、方便离心柱型,不需要使用有毒的、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。 保存:RT,有效期12个月 注意事项: 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。 结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。 电泳时好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。也可以选择可见光染料染色后在可见光下切胶会避免紫外对DNA损伤。 回收率与片段大小、凝胶浓度、初始DNA量和洗脱体积有关。 操作步骤: 提示:次使用前请先在漂洗液WB中加入量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 切取含DNA片段的PAGE凝胶(100mg左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入1.5mL离心管中,用移液枪头尽可能捣碎(好先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎),捣得越细越好。 向凝胶中加入1-2倍体积的Diffusion Buffer (如100mg凝胶加入100-200μL Diffusion Buffer),55℃温浴30分钟-2小时,期间每15分钟涡旋震荡混匀,促进胶中DNA扩散到溶液中。 一般来说,回收片段越大,DNA扩散需要的时间越长,100bp左右的DNA片段温浴30分钟就可以(时间长些也不影响回收效果); 如果回收500bp-1000bp的DNA片段,可以将温浴时间延长3-5个小时。也可以37℃温浴12-16小时过夜。 12,000rpm离心5分钟。小心取上清转入新的离心管。记录上清体积。 加入9倍上清体积的Binding Buffer,混匀。回收片段>100bp时,加5倍上清体积的Binding Buffer即可。 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。吸附柱大容积为750μL,若溶液体积大于750μL,可分批加入。 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。 重复步骤6一遍。 将吸附柱EC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μL洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。如果需要较高浓度核酸,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要核酸浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是小体积不应少于25μL,体积过小降低核酸洗脱效率,减少产量。 |
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