产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
高纯度质粒提取试剂盒(1~5mL) | High purity Plasmid Extraction Kit(1-5mL) | 100次|200次 | CS-01F96580 |
本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性,可以从1~5mL大肠杆菌LB培养液中快速提取3~20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而,对质粒纯度要求更高的转染实验(要求无内毒素),此试剂盒不能达到要求。
尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒(>10kb),但我们不推荐使用。如果一定要使用,请参考以下方法:加大菌体使用量(使用5~10mL过夜培养物),同时按照比例增加P1、P2、P3的用量;洗脱缓冲液应在70℃预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率,其它步骤相同。 本试剂盒使用了Lysis Dye,菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验,所以我们增加了Lysis Dye(一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂)来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后,Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色;加入P2后,Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色,裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清,如果红色非常均一,表明裂解充分;在完全裂解的体系中加入P3混匀后,体系立即变为黄色,任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。 本试剂盒增加了去蛋白液PD,能更加彻底地去除蛋白污染,得到纯度更高的质粒。
保存:室温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2~8℃。2~8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNase A在-20℃可稳定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2~8℃保存,可稳定保存半年。 |
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