上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
PCR产物纯化试剂盒
型号:
CS-01F96579
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产品简介
PCR产物纯化试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

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规格

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PCR产物纯化试剂盒

PCR product purification kit

100|200

CS-01F96579

本试剂盒采用离心吸附柱结合独特的缓冲液系统,从酶切、PCR等反应溶液中纯化DNA片段,同时除去蛋白质、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒可回收100bp10kbDNA片段,回收率大于80%<100bp>10kbDNA片段回收率为3050%)。每个吸附柱每次多可吸附的DNA量约为10μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

保存条件:

本试剂盒在室温(1525℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于28℃。

注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热1020分钟,以平衡溶液温度。

操作步骤:

如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

PCR反应液中直接加入5倍体积的PB液,颠倒混匀后,全部加入到吸附柱CA2中,10000g离心3060秒,到掉收集管中的废液,将吸附柱CA2重新放入收集管中。

注:

如果PCR反应体系使用了石蜡油,无需去除,但要使用10倍体积的PB液。

如果反应体系小于50μL,用水补至50μL体系,再加入PB液。

如果体系体积大于700μL,请分次上柱,保证全部溶液均加入到吸附柱中。

向吸附柱CA2中加入700μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),10000g离心3060秒,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。

向吸附柱CA2中加入500μL漂洗液PW10000g离心3060秒,倒掉废液。

将离心吸附柱CA2放回收集管中,10000g离心2分钟,尽量除去漂洗液。

注意:此步必不可少!如果漂洗液有残留,将会影响回收效率和DNA质量,进而影响下游实验;离心后将吸附柱盖子打开,室温放置2分钟,这样将有助于彻底挥发残余乙醇。

将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟。10000g离心2分钟收集DNA溶液。

注意:

可将洗脱缓冲液EB预热到6070℃后再加到吸附膜上,这样可以提高洗脱效率。

CA2柱的洗脱体积不应少于20μL,体积过小将会降低回收效率。

洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.08.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。

DNA产物-20℃保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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